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試劑 > 細胞培養(yǎng)
lipoJet2000轉染試劑是一種多用途轉染試劑，可在各種貼壁和懸浮細胞系中提供高效轉染。lipoJet2000轉染試劑可轉染siRNA、shRNA、質粒DNA等
以轉染六孔板的貼壁細胞為例：
1，接種細胞。轉染前一天將細胞接種至六孔板內。細胞接種數(shù)量視其生長速度而定，一般為1×106個細胞。轉染時要求細胞匯合度為90~95%。轉染前兩小時對細胞進行換液。
2，將4ug的質粒DNA加至250ul的OPTI-MEM培基中，混勻。
3，將10ul的LipoJet2000加至另外250ul 的OPTI-MEM中，輕輕混勻，室溫靜置5分鐘。
4，將DNA懸液和LipoJet2000懸液混合，總體積500ul，輕輕混勻，室溫靜置20分鐘。
5，將DNA和LipoJet2000混合液加至六孔板的孔內，前后左右晃動孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6，轉染4-6小時后，細胞換液，每孔2ml培基。
7，轉染18-48細胞后，收集細胞檢測表達，或加入抗性培基篩選穩(wěn)定表達克隆。
注： 1. 如果沒有OPTI-MEM培基，用培養(yǎng)細胞的無血清基礎培基替代也可以。
2. 該說明為一個孔的用量，同時轉幾個孔時按需加倍。若轉染其他類型孔板，DNA和LipoJet2000用量參見試劑盒說明書中的表格。可根據實際質粒和細胞的轉染效率，分不同量摸索最佳DNA和LipoJet2000的混合比例。
3．轉染4-6小時后也可以不換液，但由于LipoJet2000具有一定的細胞毒性，作用時間過長可能使某些細胞出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象，建議換液。
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